一、固定剂的选择及固定时间(详见表5-9)
(1)Karovsky's 液pH7.3。
(2)PAP液(Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative)
配制见附录一。
表5-9 各种抗原固定剂的选择及固定时间
待检抗原 | 固定剂的种类 | 固定时间 |
蛋白质 | ||
酶 | 冰冻切片不固定,或用95%乙醇,B5固定液 | 10 min |
激素 | 冰冻切片,涂片,印片,不固定或丙酮,甲 | 10 min |
醇,乙醇,PEG固定,B5固定液固定 | 4℃30 min | |
免疫球蛋白 | 中性福尔马林,四氯化碳(1%甲醛) | 30 min |
白蛋白 | 95%乙醇含1~5%冰醋酸 | 30 min |
纤维蛋白元 | 同上 | 30 min |
病毒 | 丙酮,100%乙醇,甲醇,乙醚 | 30 min |
糖蛋白 | PLP,丙酮 | 30 min |
脂质Forssman | 中性福尔马林 | 20 min |
抗原 | 2.5%硫代硫酸钠,冰冻切片不固定 | 20 min |
免疫电镜 | PLP,戊二醛,戊二醛—多聚甲醛(Kacnovsky’s 液pH7.3)PEG、ECD-G等 | 30min |
二、切片的处理与粘附。
免疫组化染色过程较长,洗的次数很多,而且均在振荡洗涤,抗原片附贴不紧,往往在最后的时刻,还没有等显色就会脱落导致前功尽弃,这个环节 虽小却会影响大局,因此,为了保证切片染色成功必须把切片处理好,解除掉片的后顾之忧(方法见第一章 )。