1.原理染色体的化学成份是核酸和蛋白质两部分。核酸以DNA为主,蛋白质有组蛋白和非组蛋白两种。因此染色体经蛋白水解酶类物质处理后,蛋白质已被水解而使DNA分子中碱基暴露,由于碱基中G/C和A/T组合的比例不同,对染料结合的程度不一,如这一段A/T碱基的成份多,则Giemsa染料易与它结合成深染;另一段G/C碱基的成份多,则Giemsa染料不易与其结合,结果成淡染,由于整条染色体上A/T和G/C的分布不匀,这样在染色体上呈现出深浅不一的条纹或者称带纹,该技术用Giemsa染色,故其带型称为G带。
2.操作过程
(1)按常规染色体技术制片。
(2)制好的染色体玻片,在80℃烘箱中,烘烤2h,置于室温。
(3)4℃冰箱PBS液5min。
(4)4℃冰箱PBS缓冲液含胰蛋白酶终浓度0.025%,消化10min。
(5)蒸馏水洗净胰酶。
(6)Giemsa染色20min。
(7)蒸馏水洗净染色液,晾干镜检。
4℃低温胰酶处理片子,其优点是:时间较长,易掌握。配制1次试剂可用1~2个月。