胶体铁的呈色产物亚铁氰化铁是一络合物（解离常数1×10-35），一经形成，难以再与其它化学物质发生反应。蓝色的亚铁氰化铁与棕色的DAB产物及黑色的银颗粒颜色对比明显，因此强结合免疫酶及IGSS进行光镜下抗原的双标及多标记。胶体铁（颗粒1nm）标记抗体直径比常用胶体金（5～40nm）及铁蛋白标记抗体（12nm）小，因而对固定组织具有更好的穿透力，可用于抗原的超威结构定位，尤其是免疫电镜的包埋前染色。结合免疫酶及不同大小胶体金标记抗体，还可用于抗的双标记及多标记。
非特异性背景染色是免疫组化染色过程中经常遇到的问题。组织中的内源性过氧化酶活性及色素常会干扰免疫过氧化酶染色；而胶体金非特异性吸附组织是构成IGSS背景染色的主要原因。胶体铁与抗体结合呈电中性后，很少再与组织发生吸附，并且其染色不受内源酶活性的干扰。普鲁士蓝反应只显示标记的三价铁，不能显示组织中内源性二价铁（除外含铁血黄素，但可通过连续切片H·E染色对照排除），因而背景干净。另外免疫斑点试验和组织染色结果表明，免疫胶体铁间接法敏感性与IGSS基本相同但高于ABC染色，从上述两方面看，该方法要优于免疫酶及免疫金银染色。
