免疫荧光间接法用于研究人和实验动物对疟原虫感染的免疫反应,疟疾流行病学调查和临床诊断有很大的实用价值。
1.抗原标本人疟原虫标本制备:采用多种疟原虫混合抗原,制作涂片,甲醇或丙酮固定。要每个高位中视野含裂殖体总数约15个即可。或用易感猴的各种疟原虫感染的红细胞。
鸡疟原虫抗原标本制备:取感染疟原虫后第9~11天之间的鸡血制备血膜,贮于4℃或-20℃下,用前丙酮固定10min。
2.待检血清采血方法同血吸虫法。
3.荧光抗体常用抗人IgG荧光抗体。
4.检查方法待检血清以1:20起始稀释,按间接法染色,镜检。
5.结果判断阳性结果,人类疟原虫包涵体呈现明亮的黄绿色荧光。鸡疟原虫抗原主要显示胞浆染色。1:16或1:20稀释待检血清阳性时,可以继续稀释作滴度检查。低于1:20的结果无意义。用人类疟原虫多种混合抗原和单抗原,病人抗体染色效价可达1:65536,1:1024~1:4096者占1/3。以鸡疟原虫作抗原,效价最高1:640,以恶性疟最高为1:150,间日疟为1:40。