三、应用特异单引物法标记DNA探针

应用探针DNA上的一个片段作为DNA引物，以环化探针DNA的重组质粒DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下，通过变性，退火和延伸过程，使探针DNA得到标记。反应在0.5ml离心管内进行，总体积为25μl，内含50mmol/l Tris—HCl pH7.5, 10mmol/L MgCl2、BSa 5mmol/L、80ng引物DNA和0.1μg连接的DNA或0.1μg质粒。反应管在95℃变性5min，取出，稍离心，立即放入37℃C水浴保温2min使DNA退火，加入1UE.coli DNA聚合酶I，在37℃进行延伸反应。对环化基因，延伸18min，对质粒DNA延伸35min重复上述变性、退火和延伸过程1次。