以人肝细胞内HBsAg定位举例说明。
(1)切片常规脱蜡至水。
(2)Lugol's液,5min.
(3)5%硫代硫酸钠水溶液脱碘5min。
(4)用双蒸馏水冲洗干净。
(5)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min两次。
(6)用0.1%胰蛋白酶消化10min或用3mol/L尿素消化20min。
(7)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min一次。
(8)1%卵白蛋白封闭15min。
(9)马抗HBsAg抗体1:1000稀释,37℃1~2h 或4℃过夜。
(10)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min两次。
(11)1%卵白蛋白封闭10min。
(12)1:40,PAG,37℃45min。
(13)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min两次。
(14)双蒸水洗5min,两次。
(15)物理显影见后所述。
(16)双蒸水洗5min,两次。
(17)苏木素衬染。
(18)酒精常规脱水,透明,封固。
结果,光镜下见肝细胞胞浆内有膜或包涵体形分布的阳性黑色状颗粒,背景干净。