第一节　血清载脂蛋白定量的方法学及其参考值的评价(当前章节内容组合)

一、载脂蛋白测定方法

1．单向免疫扩散法（radialimmunodiffusion,RID）

该法较简单，一般实验室均可进行。消耗较多的抗血清，扩散过程至少24h，最多需72h，测定下限值为10μg/ml。该方法虽然简单，应严格控制有关条件如：含抗血清的琼脂糖凝胶厚度要均匀；加入小孔的稀释抗原（血清）量要准确；含ApoB的脂蛋白如VLDL和LDL颗粒大小不一，如琼脂糖凝胶浓度在1.5%～2.0%,可能仅测出LDL的ApoB，大颗粒的LDL及VLDL的ApoB可能无法测出，因为难以穿过琼脂糖凝胶的孔隙。另外，扩散过程中，凝胶板一定要水平，否则易使扩散环呈椭圆形，难以准确测量直径。一般使沉淀环以3.5～10.0mm为宜，应在两个方向测量直径，其精度要求达到0.1mm。采用五种不同浓度参考值，测定沉淀环面积对相应浓度关系以曲线回归方程作图。

2．电免疫测定法（electroimmunoassay,EIA）

该法灵敏，抗血清用量少，如琼脂糖缓冲液中加入聚乙二醇及甘氨酸，其电泳时间可缩短一倍，火箭峰高以1～4cm为宜，火箭峰的测量可以计算面积或峰高，峰高从中心量起。测量精度最好能在0.1mm,灵敏度约2μg/ml，又称为火箭电泳法。

3．免疫比浊法(immunoturbidimetryassay,ITA）

简便快速，在自动分析仪进行操作并能批量检测，是目前临床使用最多的方法学。免疫比浊法有两种：一是测定光散射的，又名免疫散射比浊法（INA）；需用特殊的激光浊度仪；另一种是利用光度计测定通过混浊溶液后的透光强度，称为透射免疫比浊法（ITA），其灵敏度低于INA。比浊法可以终点法和速率法测定，速率法是根据散射光强度与时间的关系，以微机处理计算出抗原抗体复合物形成的最大反应速度，后者与溶液中抗原量成正比，常可在1min内完成测定过程，可自动扣除空白；终点法比速率法稳定，一般多用终点法。

4．酶联免疫法（enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA）

该技术已广泛应用于极微量蛋白的定量测定，可测出ng级水平的抗原或抗体含量，该法可用于ApoE、C-Ⅱ、C-Ⅲ等含量较少的载脂蛋白的定量测定。

5．放射免疫法（radioimmunoassay,RIA）

该法灵敏，抗血清用量少，所需设备较多，一般用125I标记抗原作为示踪物，除ApoC-Ⅰ（不含酪氨酸）以外，都可以作碘标记（氯胺T法），以双抗体法测定RIA法可检测最低至3～5ng。临床检验中不常用此法，主要用于动物实验的科学研究工作。

还有荧光免疫法和化学发光法等灵敏度很高的方法。

血清载脂蛋白测定的方法，从测定原理、方法学评价及参考值，刘秉文和李健斋等人作了大量的工作，为国内的载脂蛋白测定的临床应用奠定了基础。周新曾于1986年首先在国内研制成功抗人ApoB100血清，其后，国内同仁陆续研制出ApoAⅠ、AⅡ、AⅣ、E、CⅡ、CⅢ抗血清，并广泛应用于临床的疾病诊断，在部分大医院已成为常规检查项目。

刘秉文在“脂蛋白与动脉粥样硬化“一书中全面总结了国内外载脂蛋白测定的方法学及其参考值，本节将引用如下比较表：

表18-1　ApoAⅠ免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA RID INA ITA
抗体 P，M P，M P P，M P P
灵敏度（n） 0.3～10 0.1～0.5 100 100 150 100
测定范围（ng） 1～200 0.5～15 100～500 200～800 200～500 200～600
批内CV（%） 3～9 4～8 3～5 6 3～7 1
批间CV（%） 5～10 8～10 3～9 10 6～7 6
正常值（g/L） 1.0±0.2 1.5±0.2 1.2±0.2 1.2±0.1 1.2±0.2 1.7±0.2

P:多克隆抗体；M：单克隆抗体；RIA：放射免疫法；ELISA；酶联免疫法；RID：单向免疫扩散法；INA：免疫散射比浊法；ITA：免疫透射比浊法。

（源自：刘秉文，1995.）

表18-2 ApoAⅡ免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA RID INA ITA
抗体 P P，M P P P P
灵敏度（g） 0.5 20 5 30 20
测定范围（ng） 1～20 5～50 30～60 50～400 50～900 40～150
批内CV（%） 7 8 5 5 5 5
批间CV（%） 9 7 8 - 7 6
正常值（g/L） 0.25±0.4 0.35±0.05 0.76±0.2 0.29±0.02 0.37±0.09 0.36±0.03

（源自：刘秉文，1995.）

表18-3 ApoAⅣ免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA
抗体 P P P
灵敏度（g） 5 0.2 20
测定范围（ng） 5～50 0.5～8 50～200
批内CV（%） 5 3.60 5
批间CV（%） 7 8 9
正常值（g/L） 0.17±0.03 0.14±0.05 0.14±0.04

（源自：刘秉文，1995.）

表18-4 ApoB100免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA RID INA ITA
抗体 P，M P，M P P，M P P
灵敏度（n） 5～10 2～20 50～300 300 300 300
测定范围（ng） 0～100 2～10 20～500 50～600 300～500 100～500
批内CV（%） 4～8 4～7 1～7 3～7 4～7 2
批间CV（%） 7～11 10 3～10 6～7 7～8 2
正常值（g/L） 0.9±0.2 0.85±0.1 0.6±0.3 0.8±0.2 0.8±0.2 0.8±0.3

（源自：刘秉文，1995.）

表18-5 ApoCⅠ免疫测定法的比较

RIA ELISA INA
抗体 P P P
灵敏度（n） 1 5 50
测定范围（ng） 5～30 15～100 -
批内CV（%） 7 3 5
批间CV（%） 9 5 8
正常值（g/L） 0.05±0.03 0.06±0.002 0.06±0.01

（源自：刘秉文，1995.）

表18-6 ApoCⅡ免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA RID ITA
抗体 P P P P P
灵敏度（g） 10 0.3 45 40 10
测定范围（ng） 10～80 0.5～5 70～600 40～600 12～50
批内CV（%） 6 3 6.5 2.1 3.3
批间CV（%） 10 8 8.2 3.9 6.2
正常值（g/L） 0.04±0.01 0.033±0.008 0.04±0.002 0.039±0.017 0.04±0.01

（源自：刘秉文，1995.）

表18-7 ApoCⅢ免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA RID INA ITA
抗体 P P P P P P
灵敏度（g） 1 0.3 10 76 20 15
测定范围（ng） 2～20 1～6 20～80 76～600 50～400 30～120
批内CV（%） 13 4.3 8 2.5 6.3 5.2
批间CV（%） 13 4.3 8 3.5 6.3 5.2
正常值（g/L） 0.15±0.06 0.16±0.03 0.12±0.04 0.127±0.037 0.12±0.03 0.11±0.03

（源自：刘秉文，1995.）

二、人血浆（清）载脂蛋白参考值比较

刘秉文于1995年对国人血浆（清）各项载脂蛋白参考值与国外参考值作了详细的比较，其报道见表18-9、18-10、18-11、18-12、18-13、18-14、18-15。

表18-8 ApoE免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA RID ITA
抗体 P P，M P P P
灵敏度（n） 0.2～8 0.5 20 35 5
测定范围（ng） 0.8～100 0.5～6 20～200 50～300 20～400
批内CV（%） 6 4 8 5.9 2
批间CV（%） 9 8 5 7.2 5
正常值（g/L） 0.05±0.02 0.04±0.01 0.10±0.04 0.035±0.01 0.04±0.01

（源自：刘秉文，1995.）

表18-9 国人血浆ApoAⅠ含量与国外报道的比较

作者 发表时间 方法 例数 性别 年龄 均值±s（mg/dl）
张祖辉 1998 RID 307 男 20-77 122.1±13.7
刘秉文 318 女 20-77 125.5±15.9
李键斋等 1986 EIA 291 男+女 19-50 119±17
周新等* 1990 EIA 692 男 13-85 129.1±16.1
477 女 18-80 130.5±14.2
Albers等 1976 RID 20 男+女 11.5±7.3 115.7±7.3
Cheung等 1977 RID 172 男 20-65 120±20
188 女 20-65 135±25
Reman等 1978 RID 95 男 40-49 137±23
104 女 40-49 137±23
Schonfelcl等 1974 RIA 41 男 13-58 100±35
34 女 16-58 104±34
Karlin等 1976 23 男 20-39 130±3
19 女 20-39 154±6
Avogaro等 1978 EIA 60 男 20-60 128±22
60 女 20-60 134±20
Mordasini等 1980 EIA 50 男 20-60 113±9
50 女 20-60 125±17
Miller等 1980 EIA 8 男 34-70 122±27
8 女 52-68 149±20
Rosseneu等 1981 IAN 12 男 29 139±15
14 女 30 147±24
Assmann等 1982 INA 3032 男 20-65 136±23
1367 女 20-60 146±25

（源自：刘秉文，1995）

*：作者补充。

表18-10 国人血浆ApoAⅡ含量与国外报道的比较

作者 发表时间 方法 例数 性别 均值±s（mg/dl）
罗静聪 1988 RID 76 男+女 26.7±4.6
刘秉文 1988 ELISA 41 男+女 24.2±5.9
胡维诚 1987 RID 160 男+女 27.0±4.4
Curry等 1976 RID 19 男 78.0±1.7
19 女 83.0±25
Cheung等 1977 RID 172 男 33.0±5
188 女 36.0±6
Assmann等 1977 EIA 15 男 34.1±5
15 女 38.3±5.5
Schonfeld等 1977 RLA 29 男+女 40.5±8.9
Maupovic等 1981 ELA 50 男+女 68.0±18
Goldberg等 1980 RIA 50 男 25.0±1
50 女 26.0±1
De Backnev等 1982 INA 70 男+女 43.0±6.9
Zech等 1983 RID 27 男+女 24.0±0.6
Noma等 1983 RLA 27 男+女 32.0±8.3
Nukita等 1984 EIA 156 男+女 40.0±9

（源自：刘秉文，1995）

表18-11 国人血浆ApoB含量与国外报道的比较

作　者 发表时间 方法 例数 性别 均值±s（mg/dl）
周新等 1986 EIA 608 男 83.2±13.9
511 女 80.4±13.4
李健斋等 1986 EIA 727 男+女 76±19
吴兆丰、刘秉文 1987 RID 304 男 87.9±14.4
320 女 86.7±14.4
Albers等 1975 RIA 349 男+女 81.0±20
Bantorich等 1975 RIA 82 男+女 90.0±24
Bedford等 1976 RIA 128 男+女 87.0±30
Schonfeld等 1974 RIA 42 男+女 83.0±16
Brussaard等 1980 EIA 60 男+女 63±16
Fruchart等 1981 EIA 144 男+女 90
Curry等 1978 EIA 38 男 90±2.0
36 女 88±11
Curry等 1978 RID 20 男+女 87±26
Lees等 1970 RID 64 男+女 83±25
Snuderman等 1975 RID 31 男 82±22
Fievet等 1979 INA 206 男 129±31
271 女 120±34
Heuck等 1979 INA 68 男+女 82.0±23
Rossenue等 1981 INA 70 男 92±13
Durrington等 1976 INA 29 男+女 85±11

（源自：刘秉文，1995）

表18-12 国人血浆ApoCⅠ含量与国外报道的比较

作　者 发表时间 方法 例数 性别 均值±s（mg/dl）
傅明德等 1987 ELISA 202 男 7.6±2.5
214 女 8.0±2.3
Polz等 1980 RID 10 男+女 6.9±2.0
Curry等 1981 ELA 68 男+女 6.0±1.5

（源自：刘秉文，1995）

表18-13 国人血浆ApoCⅡ含量与国外报道的比较

作　者 发表时间 方法 例数 性别 均值±s（mg/dl）
傅明德等 1987 ELISA 202 男 5.2±1.9
241 女 4.9±1.8
范萍等 1989 RID 67 男+女 3.9±1.7
Schonfeld等 1979 RIA 93 男+女 3.9±1.4
Curry等 1981 EIA 68 男+女 4.0±2.0
Kashyap等 1977 RIA 32 男+女 5.0±0.4

（源自：刘秉文，1995）

表18-14 国人血清ApoCⅢ含量与国外报道的比较

作者 发表时间 方法 例数 性别 均值±s（mg/dl）
傅明德等 1988 ELISA 134 男 11.6±3.6
135 女 12.0±3.7
范萍等 1989 RID 67 男+女 12.7±3.7
刘秉文等 1987 IRA 21 男+女 9.2±2.1
Schonfeld等 1979 RID 93 男+女 15.4±6.2
Curry等 1980 ELA 54 男+女 10.9±3.0
Kashyap等 1981 RIA 29 男+女 11.1±0.9

（源自：刘秉文，1995）

表18-15 国人血浆ApoE含量与国外报道的比较

作者 发表时间 方法 例数 性别 均值±s（mg/dl）
刘铭锋、刘秉文等 1987 ELISA 42 男+女 3.57±1.24
刘铭锋、刘秉文等 1987 ELA 50 男+女 4.70±1.18
刘铭锋、刘秉文等 1992 RID 116 男 3.95±0.98
122 女 4.00±1.32
张东升、夏辉明 1991 ELISA 25 男+女 3.45±1.24
Blum等 1980 RIA 26 男+女 3.6±1.3
Gregg等 1984 RIA 12 男+女 4.8±1.2
Wesgraber等 1984 RIA 男+女 5(3.5-7.0)

（源自：刘秉文，1995）

王抒、李健斋等于1996年报道283例血清各项载脂蛋白测定值及百分位数，如表18-16、18-17、18-18所示。这批数据是目前国内采用同一份标本检测脂质、脂蛋白和载脂蛋白项目最多的1次报道。除了作为参考值供临床应用外，并阐明了各项指标之间的相关性。笔者予以抄录，供参考。

表18-16 血脂与脂蛋白水平（mmol/L）

项目 男（225例） 女（58例） P值
TC 4.87±0.73 5.16±0.84 ＜0.05
TG 1.27±0.66 1.25±0.71 ＞0.05
HDL-C 1.41±0.35 1.54±0.36 ＜0.02
HDL2-C 0.56±0.17 0.63±0.19 ＜0.02
HDL3-C 0.86±0.23 0.91±0.19 ＞0.05
LDL-C 2.95±0.68 3.13±0.12 ＞0.05

（源自:王抒，1996）

表18-17 几项常用比值*

项　目 男 女
LDL-C/HDL-C 2.21±0.72 2.16±0.80
HDL2-C/HDL3-C 0.66±0.12 0.69±0.15
ApoB/ApoAⅠ 0.72±0.16 0.74±0.17
ApoAⅠ/ApoAⅡ 4.10±0.65 4.10±0．68
ApocⅡ/ ApoCⅢ 0.39±0.12 0.41±0.16

男女组间无显著意义

（源自：王抒，1996）

表18-18 各项载脂蛋白测定值与百分位数

项目 X±S p5 p25 p50 p75 p95
男（225例）
ApoAⅠ(g/L) 1.42±0.17 1.17 1.30 1.43 1.51 1.72
ApoAⅡ(g/L) 0.36±0.66 0.28 0.32 0.35 0.40 0.46
ApoB(g/L) 1.01±0.21 0.72 0.86 1.00 1.14 1.38
ApoCⅠ(mg/L) 53±17 31 43 50 60 83
ApoCⅡ(mg/L) 34±16 13 24 31 42 69
ApoCⅢ(mg/L) 44±17 26 34 41 51 74
ApoE(mg/L) 44±17 26 34 41 51 74
Lp(α)(mg/L) 144125 26 53 107 185 382
女（58例）
ApoAⅠ(g/L) 1.45±0.14 1.21 1.34 1.44 1.55 1.74
ApoAⅡ(g/L) 0.36±0.06 0.26 0.33 0.36 0.39 0.44
ApoB(g/L) 1.07±0.23 0.71 0.90 1.08 1.20 1.49
ApoC(mg/L) 53±18 30 39 51 61 92
ApoCⅡ(mg/L) 41±18 20 28 38 49 77
ApoCⅢ(mg/L) 104±40 52 72 100 129 184
ApoE(mg/L) 51±18 33 37 48 58 89
Lp(α)(mg/L) 154±116 35 66 117 207 464

国内的已有报道表明，人血清载脂蛋白参考值水平尚有一定的差异。引起这种差异的原因是多方面的，目前认为主要原因有：①检测方法与仪器不同；②试剂质量尤其是抗血清技术标准不统一；③国内尚未采用完全符合国际标准的定值血清；④人群的生活习惯及种族差异。为此对于国人的血清载脂蛋白参考值的确立，尚需付出艰辛的劳动。