四、血清Lp(α)测定法

1.原理

血浆(清)中脂蛋白(α)(Lp(α))与Lp(α)的单克隆抗体(鼠)结合形成抗原抗体免疫复合物,有浊度改变,测定溶液界质中混浊度的光密度改变,求其血浆中Lp(α)的含量。

Lp(α)+抗人Lp(α)→抗原抗体复合物→测定光密度

2.试剂与仪器

试剂(第一化学);Lp(α)缓冲液(R1);Lp(α)抗体液(R2)。

仪器:生化分析仪(以CL-7200型为例)

3.操作方法

以△A=A2-A1进行运算Lp(α)浓度。

4.定标:

取Lp(α)定值液,用0.9%NaCl液稀释。

采用上述操作步骤,按免疫测定法定标,其操作方法及标准曲线如图16-3所示。

Lp(α)免疫测定法的反应过程光密度变化值mAbs(A)及其检测的标准曲线图

图16-3 Lp(α)免疫测定法的反应过程光密度变化值mAbs(A)及其检测的标准曲线图(B)(CL-7200型)

上机参数(以CL-72OO型为例)

名称 LPA 名称 LPA
测定方法 Endpoint 标准(1) 0.72
标本量 16μl 标准(2) 1.44
R1试剂量 280μl 标准(3) 2.88
R2试剂量 40μl 标准(4) 5.75
反应时间 第一波长 5min 标准(5) 11.5
第二波长 4.99min 波长1.2 [340][750]

5.注意事项:

(1)操作时,标本和试剂无需处理;

(2)血浆或血清标本均可检测。标本置2~21℃保存1周不变;

(3)标本浓度超过定标最高值时,应用生理水稀释后再测;

(4)抗体试剂(R1)避免反复接触;

(5)测定时避免日光直接照射。