一、高密度脂蛋白胆固醇测定

血浆中脂蛋白有多种，测定其各自的含量对于了解机体正常及疾病过程中脂质代谢状况有重要的临床意义。HDL是一组不均一的脂蛋白颗粒，其胆固醇含量占血浆总胆固醇量的25%～35%。由于血浆中所有脂蛋白均含有胆固醇，因此，只有先分离出HDL才能对其进行定量。分离HDL的方法中，沉淀法是目前临床使用最多的方法，操作简便快速。沉淀法原理是利用多聚阴离子和二价阳离子共同作用于脂蛋白，并选择性地使含ApoB的VLDL和LDL脂蛋白沉淀，再测定含HDL的上清液胆固醇，即高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）。定量HDL全量是很困难的，因为它是蛋白质和脂类的混合物，故以测定HDL中所含胆固醇含量作为HDL定量依据。

要测定血清中HDL-C，就必需先沉淀HDL以外的脂蛋白，即VLDL和LDL。使血清中VLDL和LDL沉淀的试剂很多，常用的有四种：①肝素-锰沉淀法，该法操作简便易行，一旦遇上血脂升高的标本，有沉淀不完全的差异；②硫酸葡聚糖-镁法，该法也简单易行，试剂较贵而难买到；③聚乙二醇法，虽然简便易行，若遇高脂血症标本，其重复性差；④磷钼钨酸-镁法，操作简便易行，结果准确，是目前临床推荐使用的方法；⑤另有一种不沉淀VLDL和LDL也可直接测定HDL的方法，称之为直接测定法。其原理是，先用一种封阻血清VLDL和LDL，而不封阻HDL，当测胆固醇的酶试剂加入后，酶可作用于HDL的胆固醇进行化学反应，测出其浓度，但酶试剂就无法使已被试剂封阻的VLDL和LDL的胆固醇进行反应，这种直接法操作更为简便，无需离心等繁杂步骤，便于在自动生化分析仪上进行HDL-C测定，结果准确可靠，缺点是成本过高。下面仅介绍目前推荐使用的方法。

（一）原理

磷钨酸-镁（PTA-Mg²⁺）沉淀血清中含ApoB的脂蛋白（VLDL、LDL），上清液中只含HDL，用酶法测定上清液中胆固醇，即HDL-C。

生成的醌亚胺与HDL中的CE及FC成正比。

2．试剂组成

（1）沉淀剂磷钨酸钠4g溶于50ml双蒸水中，加入1mol/l NaoH16ml，充分搅拌后，再加双水至100ml，调pH到7.6。再取40ml此溶液，加2mol/l MgCl₂10ml，混匀，再加水至100ml，此为应用液。

（2）胆固醇酶法测定试剂（同第十五章）

（3）胆固醇标准参考液（同第十五章）

3．操作

（1）空腹12h，抽取静脉血，不抗凝，分离血清备测。于24h内操作完毕。

（2）其他操作同前。

4．注意事项

（1）室温以15～20℃为宜，＜15℃或＞30℃时应增加或减少静置时间，离心转速要恒定一致。

（2）离心沉淀后，要立即吸出上清进行测定，否则结果偏离不准。

（3）若血清TC超过500mg/dl时，上清液会出现混浊，表明有部分胆蛋白漂浮在上清液中未沉淀完全，此时将血清稀释重新沉淀，其所测值乘以稀释倍数。

（二）血清HDL-C选择遮敝直接测定法。

1．原理

含反应抑制剂的阴离子表面活性剂加入血清中后，与CM、VLDL和LDL紧密结合，少量与HDL结合。尔后，再加入反应促进剂的聚阴离子表面活性剂后，HDL溶化并释放出胆固醇，与胆固醇测定试剂进行反应，达到仅测出高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）的目的，其反应全过程为：

2．试剂（第一化学）

RⅠ：前处理液（第一反应液）

RⅡ：第二反应液（可溶性表面活性剂）及显色液

HDL-C参考血清

3．操作

按双试剂双波长法在CL-7200型全自动生化分析仪进行检测，有关参数如表16-1所示。

表16-1 HDL-C检测参数

标本浓度按△A=A₂-A₁的吸光度计算

4．特点

（1）直接测定，无需预处理。

（2）操作简便，减少影响准确性的因素。

（3）标本及试剂用量少，准确性高。

（4）抗干扰能力强，适合于自动化分析。

（5）该法CV为5%以下，回收率90%～110%。线性范围（0～5.85mmol/L）。

5．注意事项

（1）待测血清标本于当日测试，2～8℃保存，一周内测定，-20℃长期保存，对测定结果无影响。

（2）干扰物维生素C500mg/L、胆红素200mg/L、Hb5.0g/L以下均不影响测定结果。