附录 抗-HBs效价测定(RIA法)

1 试剂

1.1 用(人)HBsAg(亚型ad,ay)包被的聚乙烯珠子。

1.2 125I标记的(人)HBsAg(亚型ad,ay)试液。

1.30.01mol/L Tris缓冲液,内含4%牛血清白蛋白,pH7.4。

1.4 抗-HBs参比标准品,含抗-HBs10~160mIU /ml。采用四点法 或五点法。

2 测定

先将检品按估计效价稀释成不同倍数,使其cpm计数落在参比标准品直线范围内。一般10%肌注丙种球蛋白可进行10、20、40倍稀释。乙型肝炎免疫球蛋白可进行500、1000、2000倍稀释。正式试验时根据预试结果调整稀释倍数。预试验用3个稀释倍数,正式试验用2个稀释倍数。

2.1 各取0.2ml参比标准品及不同稀释倍数的检品,加入反应盘的不同孔中。预试验时每个稀释倍数检品加1孔,正式试验每个稀释倍数检品加3孔。于每孔中小心加入一个HBsAg包被珠子,盖上密封胶纸,振荡或轻拍反应盘,排出气泡,并使珠子全部浸入液体中,置室温(15~30℃)结合18小时(16~20小时)。

2.2 去除胶纸,吸出孔内液体,每珠用4~5ml蒸馏水洗3次,最后一次尽量将水吸干。

2.3 于每孔中加0.2ml125I标记HBsAg试液,轻拍反应盘,排出气泡,并使珠子全部浸入液体中,盖上新的密封胶纸,置室温结合4小时(或45℃水浴2小时),去除胶纸,按2.2项冲洗。

2.4 用纸试管架将珠子从反应盘转移至塑料管中,其编号应与反应盘孔号一致。将反应管置适宜的井型γ计数器中计数cpm,洗后24小时内均可使用。

3 计算

3.1 先救求出参比标准品和各稀释倍数检品的平均cpm计数,以参比标准品抗-HBsmIu /ml为横座标,以cpm计数为纵座标在座标纸上作图,连接各点成一直线。

3.2 从标准直线上查出各稀释倍数检品的cpm计数点,并从此点向下作一垂直线,在横座标上查出抗-HBs mIU,再乘以检品稀释倍数,除以1000,求出2点或3点的平均值即为该检品的抗-HBs IU/ml。

4 注意事项

4.1 预试验时应按试剂盒要求做阳性和阴性对照。

4.2 冰箱保存的试剂,用前应先于室温内放置1小时。

4.3使用不能自动减本底的γ计数器时,应减本底后再计算。

4.4 所有测定操作应遵守同位素实验室安全防护制度。