川乌、草乌、附子及其炮制品均为中国药典1995年版一部收载的常用中药。中医认为这些药具有祛风除湿、温经止痛的作用。现代药理研究证明，乌头类中药具有镇静、镇痛、强心、抗炎、抗肿瘤等作用。由于其主要有效成分为剧毒的双酯型生物碱，而且治疗量与中毒量接近。为确保临床用药安全有效，国内外学者在乌头类生物碱的含量测定方面做了大量工作。1 分光亮度法1.1 酸性染料比色法 赵玉梅等［1］选择溴麝香草酚蓝作为酸性染料，比色法测定骨痹痛散中乌头总生物碱含量，以乌头碱(12.06mg/50ml，0.05mol/L H2SO4)作对照，提取液于波长412nm处测定吸光度并计算出乌头总碱含量。平均回收率为97.54%。乌兰娜日等［2］选择溴甲酚绿为酸性染料，以乌头碱(10mg/100ml，氯仿)作对照，于波长(415±1)nm处测定附子理中丸中乌头总碱含量。平均回收率为99.5%，RSD为1.43%。王海孙等［3］选择文献［2］的条件测定风湿骨痛酒中乌头总生物碱含量，平均回收率为98.58%，RSD为1.83%，因处方中有麻黄，所以提取液在水浴上挥去溶剂后应在105℃烘1h以使麻黄碱挥发，排除干扰。陶建生等［4］选择溴甲酚绿为酸性染料，以乌头碱做对照于波长416nm，处测定止痛酊中乌头总碱含量。平均回收率为96.9%，RSD为3.0%。杨云［5］以溴麝香草酚蓝为酸性染料，波长408nm处测定附子理中口服液中乌头总生物碱含量，平均回收率96.79%。
1.2 一阶导数分光光度法 龙沛霞等［6］采用一阶导数光谱法测定制川乌、制草乌及附子中乌头生物碱含量。测得结果与中国药典(1995年版)方法的测定结果比较无显著差异，而该方法操作起来更简便。
1.3 二阶导数分光光度法 徐思文［7］采用二阶导数光谱法测定三七伤药片中总生物碱含量，样品和标准品溶液在波长(238±2)nm和(246±2)nm处有相应的吸收谷和吸收峰，而阴性对照光谱呈近平行线，不干扰样品中乌头总生物碱的定量分析。所以选择此两波长谷峰之间的导数振幅值作为三七伤药片中总生物碱的定量依据。平均回收率为99.3%。2 薄层扫描法2.1 高效硅胶G板-薄层色谱 镇痛宁注射液是由制川乌、盐酸异丙嗪等中西药结合的复方制剂，因处方中异丙嗪具碱性，用碱量法测定乌头碱含量有影响。李焕荣等［8］选择高效硅胶G板，以氯仿-醋酸乙酯-氨水(15∶20∶1)为展开剂展开，喷以碘化铋钾显色后，双波长(λs=520nm，λR=650nm)锯齿形反射扫描测定乌头总碱含量。平均回收率为97.85%，RSD为1.98%。
2.2 硅胶GF254板-薄层色谱 刘成基等［9］选择硅胶GF254板，用25%氨水饱和后于氯仿-乙醚(1∶25)展开剂中展开，紫外灯下定位，双波长(λs=240nm,λR=400nm)锯齿形反射扫描，分别测得草乌及其炮制品中酯型乌头碱含量。邹恩济等［10］用文献［9］的薄层条件测定蒙成药那如-3和嘎日迪-5中三种酯型乌头碱含量，效果良好。北川熏等［11］选择硅胶GF254板，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(10∶5∶1)为展开剂，双波长(λs=250nm,λR=400nm)扫描，考查多种乌头及其炮制品中生物碱的种类及含量差异。
2.3 硅胶G板-薄层色谱 王浴铭等［12］选择硅胶G板，以正己烷(氨水饱和)-乙酸乙酯-95%乙醇(64∶36∶10)为展开剂展开，碘蒸气显色后，双波长(λs=365nm,λR=270nm)锯齿形反射扫描测定活血壮筋丹中乌头总碱含量。平均回收率为95.75%，RSD为0.824%。杨基生等［13］选择硅胶G板，以苯-乙酸乙酯-二乙胺(7∶2∶0.4)为展开剂，以改良碘化铋钾显色，于波长495nm处扫描测定复方中药橡皮膏中乌头碱含量。平均回收率为99.3%。
2.4 G-CMC-Na板-薄层色谱 陈晓斌等［14］选择硅胶G-0.5%CMC-Na板，以正丁醇-苯-乙酸乙酯-甲醇-氨水(20.3∶14.5∶2.3∶1.5∶3.0)为展开剂展开，喷以0.05mol/L硫酸-碘化铋钾显色后，于波长(λs=503nm,λR=550nm)锯齿形反射扫描测定风湿痹痛丸中毒性成分士的宁、马钱子及乌头碱含量，其中乌头碱平均回收率为99.1%，RSD为1.2%。3 高效液相色谱法3.1 内标法 邹恩济等［15］采用反高效液相色谱法，以甲萘基为内标，分离测定两种蒙成药那如-3、嘎日迪-5中草乌的3种剧毒性成分，选择色谱柱为150mm×4.6mm id的不锈钢柱；流动相甲醇-水-氯仿-三乙醇(70∶30∶2∶0.1)，检测波长230nm。平均回收率：中乌头碱98.7%，RSD＝2.1%；乌头碱93.65%，RSD为1.1%；次乌头碱101.7%，RSD＝3.2%。
3.2 外标法 北川熏等［16］采用Kadial-Pak CN柱，以乙腈-0.01mol/L二丁基胺磷酸盐(55∶45)为流动相，测定多种中药中乌头类生物碱含量。Hideo Bando等［17］采用Nucleosil CN柱，以0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH2.5)-乙腈(71∶29)为流动相，测定日本乌头中双酯型生物碱含量。彭波等［18］采用Hh反高效液相色谱法测定川乌和附片中乌头类生物碱含量。色谱柱为ODS柱；流动相甲醇-水-乙腈(67∶33∶2)，pH4.5；检测波长235nm；柱温35℃。平均回收率：中乌头碱100.48%，RSD为1.47%；乌头碱98.07%，RSD为1.7%；次乌头碱100.65%，RSD为1.6%。朱瑞龙等［19］采用高效相色谱法测定附子理中丸中双酯型乌头碱含量。以甲醇-水-氯仿-二乙胺(70∶30∶30∶0.2)为流动相；固定相为C18(10μm,4.6mm×250mm)；检测波长279nm，平均回收率：中乌头碱97.8%，RSD为1.69%；乌头碱96.0%，RSD为2.41%；次乌头碱96.7%，RSD为1.98%。李薇等［20］采用高效液相色谱法测定肩痛散中乌头总碱含量。色谱柱为YWG-C18H37(4.0mm×300mm)；流动相甲醇-水-氯仿-三乙胺(70∶30∶1∶0.2)；检测波长240nm，平均回收率为98.4%，RSD为2.57%。4 气相色谱法
川乌、草乌是风湿骨痛酒中的主要成分，戴忠等［21］采用气相色谱法测定其中的酯型生物碱含量。色谱柱为2m×3mm玻璃柱填充102酸洗白色担体(80-100目)；固体相10%DEGS+1%H3PO4；检测器FID(230℃)；载气氮气；柱温195℃，平均回收率为98.4%。5 碱量法
小活洛丸是由制川乌、制草乌等6种中药组成。和中国药典(1995)一部颜根宝等［22］采用有机溶剂萃取，样品经分离提纯后采用碱量法测定其总乌头生物碱含量。平均回收率为94.79%，RSD为2.14%。
邓建平等［23］报道川乌、附片中乌头类生物碱含量测定方法的比较研究。各种方法各有其优点，碱量法适用于川乌、草乌、附子单味药材乌头生物碱含量测定。分光光度法一般只能测定乌头生物碱总量，若采用改良异羟酸铁比色法可测定酯型乌头碱含量，但该方法灵敏度差，干扰因素较多，重现性不够理想，有待进一步研究改进。薄层扫描法集分离、测定于一体，不仅可用于单味药材川乌、草乌、附子中乌头碱的含量测定，还广泛应用于含有川乌的复方中药制剂中酯型生物碱含量测定。高效液相色谱法可分别测定中乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量，该方法操作简便，结果准确、重现性好，是目前复方中药制剂中乌头类生物碱含量测定的首选方法。
