一、絮状沉淀试验

絮状沉淀试验为历史较久，又较有用的方法。该法要点是：将抗原与抗体溶液混合在一起，在电解质存在下，抗原与抗体结合，形成絮状沉淀物。这种沉淀试验受到抗原和抗体比例的直接影响，因而产生了两种最适比例的基本测定方法。

（一）抗原稀释法

抗原稀释法（Dean-Webb法）是将可溶性抗原作一系列稀释，与恒定浓度的抗血清等量混合，置室温或37℃反应后，产生的沉淀物随抗原的变化而不同。表12-1系以牛血清白蛋白为例的实验结果。

表12-1Dean-Webb定量沉淀试验

管号 抗原 抗体 总沉淀量 反应过剩物 抗原沉淀量 抗体沉淀量 沉淀中Ab/Ag
1 0.003 0.68 0.093 Ab 0.003 0.090 30.0
2 0.005 0.68 0.145 Ab 0.005 0.140 28.0
3 0.011 0.68 0.249 Ab 0.011 0.238 21.7
4 0.021 0.68 0.422 Ab 0.021 0.401 19.1
5 0.032 0.68 0.571 Ab 0.032 0.539 16.8
6 0.043 0.68 0.734 － 0.043 0.691 16.1
7 0.064 0.68 0.720 Ab － － －
8 0.085 0.68 0.601 Ag － － －
9 0.171 0.68 0.464 Ag － － －
10 0.341 0.68 0.368 Ag － － －

单位：mmol/L

从表12-1可以看出，1～5管为抗体过剩管，7～10管为抗原过剩管，唯第6管沉淀物最多，两者之比为16:1，即最适比。

（二）抗体稀释法（Ramon）法

本法采用恒定的抗原量与不同程度稀释的抗体反应，计算结果同上法，得出的是抗体结合价和最适比。

现今，为了取得抗原与抗体的最佳比例，已将以上两法相结合，即抗原和抗体同时稀释，称为棋盘格法（亦称方阵法），找出最佳配比。举例见表12-2。

表12-2方阵最适比测定

抗体稀释度 抗原稀释度
1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/12 对照
1/5 ＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋ ± － －
1/10 ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋ － －
1/20 ＋ ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋ － －
1/40 － ± ＋ ＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋ －
1/80 － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ －

“＋”为沉淀物量：为最适比

从表12-2可以看出，方阵法可较正确地找出抗原与抗体的最适比。如抗体用1:40。抗原则按1:320稀释；如抗原是1:160，抗本则用1:20最为恰当。